<div dir="ltr">Hello everyone,<div>for this afternoon's discussion of the lipid nanoparticle samples I would like for everyone to please review Bao Le's project request before the meeting:</div><div>Thanks, -Borries</div><div><table cellspacing="0" cellpadding="10" class="gmail-style1" id="gmail-fixed" style="border:5px groove rgb(43,78,114);width:734.995px;margin:2em 1em;table-layout:fixed;color:rgb(0,0,0);font-size:12px"><tbody><tr><th style="border:1px solid black;text-align:left">Project Description:</th><td style="line-height:1.5;border:1px solid black">Study the interaction of charged liposomes and antigen protein- COVID manuscript.</td></tr><tr><th style="border:1px solid black;text-align:left">Project GUID:</th><td style="line-height:1.5;border:1px solid black">f3e8913a-34fc-b774-01ae-2a0712ca8e85</td></tr><tr><th style="border:1px solid black;text-align:left">Goals:</th><td style="line-height:1.5;border:1px solid black">We want to study the potential interaction between 3 types of liposomes (neutral charged, negatively charged and positively charged) and the Spike protein antigen (of SAR-CoV2).<br>In theory, liposome carriers can interact with protein via several mechanism like electrostatic or van der Waals interactions, but electrostatic interaction might be the main force. This would depend on the charges of liposome and protein which in turns depends on the pH of the buffer.<br>When testing vaccines made by mixing charged adjuvanted liposomes with Spike antigen on mice, we observed higher antibody titers against Spike protein with positively charged liposomes. Therefore, we want to know if there is a correlation between antibody responses and the adsorption of antigen protein on liposomes.<br>If there is interaction/adsorption of antigen onto liposome, we think that the density of the 'complex' will increase and AUC technique might measure that and give us an insight of how much antigen protein being adsorbed and how much antigen exists in free form (non-adsorbed).</td></tr><tr><th style="border:1px solid black;text-align:left">Molecules:</th><td style="line-height:1.5;border:1px solid black">There are 5 liposome samples:<br>- 1057-014-01<br>- 1057-014-02<br>- 1057-014-03<br>- 1057-014-04<br>- 1057-014-06<br>Liposomes were made from phospholipid (DOPC, DOPC, or EPC 18:1), cholesterol (or DC-Cholesterol), and loaded with a lipophilic vaccine adjuvant INI-2002. Total lipid content is 15-16 mM.<br><br>The Spike protein (Spike 2P- Florian Krammer) is approximately 140 kDa and can from trimer. The protein solution was made in PBS buffer.</td></tr><tr><th style="border:1px solid black;text-align:left">Purity:</th><td style="line-height:1.5;border:1px solid black">n/a</td></tr><tr><th style="border:1px solid black;text-align:left">Expense:</th><td style="line-height:1.5;border:1px solid black">- Spike protein: 2 x 50 uL/vial, 2 mg/mL<br>- liposome samples: ~ 0.2 mL each, lipid content 15-16 mM<br>- The vaccine adjuvant INI-2002 loaded in liposomes can be detected at UV 210 nm but signal is low.</td></tr><tr><th style="border:1px solid black;text-align:left">Buffer Components:</th><td style="line-height:1.5;border:1px solid black">Liposome buffer: 10 mM phosphate and 150 mM NaCl, pH 6.2<br>Spike protein buffer: PBS (10 mM phosphate, 140 mM Chloride, 4.5 mM potassium, 147 mM sodium)</td></tr><tr><th style="border:1px solid black;text-align:left">Sample Handling:</th><td style="line-height:1.5;border:1px solid black">- The Spike antigen protein should be kept at -80 C. Non-infectious reagent.<br>- The liposomes should be kept at 2-8 C, do not freeze!<br>No toxic effect has been observed when ingesting or injecting these formulations and protein on lab animals. As a precaution, DO NOT SWALLOW! Wearing proper PPEs (gloves and googles) when handling these.</td></tr><tr><th style="border:1px solid black;text-align:left">AUC Questions:</th><td style="line-height:1.5;border:1px solid black">Is there difference in interaction of differing charged liposomes (neutral, +, -) with the Spike antigen?<br>We make 3 types of liposome (neutral, +, -), incubate them with Spike antigen and analyze with AUC.</td></tr><tr><th style="border:1px solid black;text-align:left">Experimental Design:</th><td style="line-height:1.5;border:1px solid black">- For in vivo study, ~30 uL liposome containing 10 ug INI-2002 is mixed with 0.5 uL of the Spike antigen stock solution (containing 1 ug antigen) to make the vaccine.<br>- Optimally, that would be nice if we can mimic this condition. However, to make it easy for the measurement, we can adjust the ratio between liposome and Spike protein to have the optimized condition for AUC measurement.</td></tr><tr><th style="border:1px solid black;text-align:left">Notes:</th><td style="line-height:1.5;border:1px solid black"><br></td></tr><tr><th style="border:1px solid black;text-align:left">Status:</th><td style="line-height:1.5;border:1px solid black">Submitted</td></tr></tbody></table></div></div>